采血管分离植物细胞膜的方法

浏览:103 发表时间:2020-09-23 18:03:56

采血管分离植物细胞膜的方法。选用卢湘仪H2050台式高速大容量采血管进行实验。我给你一种用药品比较少的。你结合自己的情况看一下。采血管

  另这种方法得到的质膜多数是微囊泡。

  这种方法我们成功提取过拟南芥,玉米胚芽鞘,烟草悬浮细胞的质膜。

  1,组织破碎,你可以用研本。如果存在大量粗纤维的话,你还可以用纱布过滤一下。

  裂解液配方,0.55M 蔗糖;0.76M Tris; 0.02M EDTA; 0.03M 抗坏血酸。用Hcl 调整HP 到7.8。原料/裂解液 1:2

  2, 研磨液 分3次低速离心分离出那些不需要的组织残渣或细胞器。 100G 10min ; 3000G 5min ; 17000G 15min。(速度不够的话适当延长时间,否则悬浮液中会存在大量的线粒体之类的细胞器)。

  3, 上一步得到的悬浮液是含有总膜的悬浮液,一般情况下, 下一步应该利用高速离心20000G以上的离心力,把所有的膜沉淀出来进一步纯化(这里你最好找个采血管,推荐选用H2050台式高速大容量采血管,离心力如果不够分离不出来,如果原料非常多的话可能会析出一些,你也可以试着改变下裂解液的蔗糖浓度,理论上密度变了以后沉降系数也会改变,不过这个要做大量的计算工作以确保不影响膜的纯度)。纯化有PEG/Dextran; 蔗糖梯度两种方法, 蔗糖梯度比较老了,效果不是很好,但是蔗糖很便宜很好弄。我们用的是6.3%PEG/Dextran 。


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